Experiment de tinció gram (observació de bacteris)
Lucía Francisco García 4t D 14/03/21
Observació de bacteris: Tinció de gram
1. Objectiu
•Familiaritzar-se amb les tècniques de fixació i tinció composta que comporta una sèrie de passos que cal seguir escrupolosament, necessaris per a l'observació diferencial de diferents parts estructurals dels bacteris.
•Utilització de l'objectiu d'immersió, enfoc i neteja.
2. Introducció
La tinció de Gram permet classificar els bacteris en dos grans grups (Gram + i Gram - ) en funció de la coloració que adquireixen segons la composició química de la seva paret cel·lular.
A continuació s'indiquen les diferents etapes de la tinció, així com la repercussió sobre la cèl·lula bacteriana:
3. Material
Per grup: Ansa de sembra o agulla emmanegada, espàtula, fogó d'alcohol, portaobjectes i cobreobjectes, cubeta i reixeta de tinció, paper de filtre, pinça de fusta, v.d.p petit, aigua destil·lada, lugol, safranina, violeta cristall, alcohol absolut.
General: Paper de fumar, xilol, oli de cedre, cultius bacterians de tipus Gram + i - .
4. Protocol experimental
El iogurt és el producte resultant de l'acidificació i coagulació de la llet (fermentació làctica). S'obté afegint a llet pasteuritzada i homogeneïtzada dos tipus de bacteris:
•Streptococcus termophilius: Responsable de l'acidificació.
•Lactbacillius bulgaricus: Responsable de la transformació de la llet en iogurt.
Els bacteris utilitzen la lactosa de la llet per a obtenir energia, i sintetitzen com a producte l'àcid làctic, que dóna al iogurt el sabor i la textura característics.
5. Fixació
•Es col·loca en l'extrem d'un porta ben net i desengreixat amb alcohol, una gota d'aigua destil·lada.
•Amb l'agulla emmanegada o anella se sembra prèviament esterilitzada a la flama, es pren una petita quantitat de suspensió de microorganismes o bé d'una colònia i posa-la sobre la gota.
•S'estén bé, homogeneïtzant fent un frotis amb un altre portaobjectes.
•Es fixa l'extensió passant el porta amb el frotis en la cara superior, 3 o 4 vegades sobre la flama (millor d'un fogó d'alcohol), escalfant suaument fins que s'assequi. (No s'ha d'escalfar en excés perquè es podria alterar la composició de la paret).
6. Tinció
•S'afegeix al porta objectes unes gotes de violeta cristall. Es deixa actuar durant 2 minuts.
•Es renta amb aigua destil·lada per decantació amb la finalitat d'eliminar l'excés de colorant.
•S'afegeix a la preparació unes gotetes de lugol. Es deixa tenyir durant 2 minuts.
•Es renta la preparació amb aigua destil·lada.
•S'aplica sobre la preparació unes gotes d'alcohol absolut i es deixa actuar uns 30 segons.
•Es renta amb aigua destil·lada, decantant.
•S'afegeixen unes gotes de safranina (colorant de contrast) i es deixa actuar durant 2 minuts.
•Es renta amb aigua corrent, decantant.
•S'asseca suaument i sense fregar entre paper de filtre.
7. Observació microsòpica
Es pot fer en sec o amb objectiu d'immersió.
Per realitzar el primer tipus d'observació cal fer un muntatge previ de la preparació afegint sobre el porta una gota de glicerina que clarifica l'observació. A continuació es col·loca un cobre i s'enfoca l'extensió a 400 augments.
És recomanable observar les preparacions bacterianes amb objectiu d'immersió. En aquest cas col·locar sobre la preparació totalment seca amb una gota d'oli de cedre o d'altres apropiats; la seva missió és evitar la sortida de radiacions lluminoses furs de l'objectiu, ja que l'índex de refracció de l'oli de cedre per exemple és de N = 1,52 és el mateix que el del vidre. S'enfoca amb el micromètric preferentment a 1000 augments. En aquest tipus d'observació no s'utilitza cobre.
•Important: Després d'utilitzar l'objectiu d'immersió s'ha de netejar bé amb xilol i paper de fumar impregnat amb xioli.
•Observació: Pel color que han adquirit els bacteris podem identificar que són de Gram - .
Comentaris
Publica un comentari a l'entrada